液相色谱常用的流动性相（高效液相色谱法的固定相和流动相）

高效液相色谱法通常是根据固定相和流动相的性质来分类的，因此，有必要再讨论一下液相色谱法中所使用的固定相和流动相的一般特性。

固定相 高效液相索赔法所用的固定相按所承受的压力可分为硬胶、半硬胶或软胶三种。固定相的选择在很大程度上取决于所要用的液相色谱方法，在液-固吸附色谱法、液-液分配色谱、化学键合相色谱法中多使用硬胶固定相，离子交换色谱中常常使用半硬胶，而在凝胶色谱中，硬胶、半硬胶和软胶固定相都可以使用。

固定相按孔隙深度又可以分为表面多孔型和全多孔型。表面多孔型的基体是球形玻璃珠，在玻璃表面涂一层多孔活性物质，如硅胶、氧化铝、聚酰胺、离子交换树脂、分子筛等，也可以支撑化学键合固定相，这种固定相的多孔层薄、孔浅、传质速度快，适合于快速分离，填充均匀紧密，机械强度高，能承受高压，适合于简单的样品及常规分析。由于多孔层较薄，进样量受到限制。全孔型固定相比表面积大，柱容量大；小颗粒全多孔型固定相孔洞浅传质速度快，柱效高，分离效果好，适合于复杂样品和痕量组分的分离分析，这类固定相在高效液相色谱法中应用最为广泛。

流动相 在气相色谱中，可供选择的载气只有三种，它们的性质相差也不大，所以要提高柱的选择性，主要是改变固定相的性质。在液相色谱中，与气相色谱不同，当固定相选定时，流动相的种类、配比能显著地影响分离效果，因此流动相的选择很重要，当色谱柱和待测样品确定后，选择什么样的溶剂做流动相，直接影响组分的分离度。通常要考虑做为待测流动相的溶剂的物理性质和溶剂强度以及溶剂的种类和配比。

选择流动相时应注意以下几个影响因素

1、有足够的溶解能力 对待测样品要有适宜的溶解度，否则，在柱头处易产生沉淀。

2、与检测器要匹配 选择溶剂时，需要考虑溶剂的物理性质对检测结果的影响。

3、纯度要高 若溶剂纯度较低，长期积累杂质而导致检测器噪声增加，柱效下降，通常采用分析纯溶剂，必要时可采用蒸馏等预处理方法进行进一步的纯化。

4、黏度要低 溶剂黏度低，有利于分离。

5、使用前需脱气 由于柱前和柱后压力相差较大，溶解在溶剂中的气体将以气泡形式逸出，干扰高压泵和检测器正常工作，因此常采用加热回流、抽真空脱气、超声波处理等方法对溶剂进行预先脱气处理。

6、避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂。

高效液相色谱仪工作原理