如何正确的进行elisa检测(ELISA实验常见问题二)

ELISA是一个非常严谨、极其考验操作者技巧和经验的实验,检测结果数值低、标准曲线梯度差、背景值高、变异系数大等诸多问题也是兵家常事。

我们将常见的ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策进行了汇总,快来看看有没有解答你现在遇到的问题呢!

整体OD值偏低或无信号

可能原因

相应对策

● 试剂盒组分失活

使用新的试剂盒,按照说明书要求保存试剂盒

● 试剂盒组分未平衡

试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验

● 试剂混用或混合不充分

保证使用试剂盒内完整一套试剂进行实验,保证溶液充分混合

● 洗液被污染

配制新的洗液

● 洗涤液浸泡时间过久或洗板次数过多

按照说明书的要求进行操作

● 孵育时间不充分

保证充足的孵育时间

● 孵育温度不稳定

检查恒温箱,确保孵育温度稳定

● 生物素化抗体或HRP酶结合物不足

保证浓缩液取量准确且稀释完全

● 生物素化抗体或酶结合物稀释不正确或步骤颠倒

按照说明书的步骤和要求进行操作

● 未加终止液

反应结束时,确保每孔加入终止液终止反应

● 终止后未及时读板

终止液终止反应后需要在10min内进行读板操作

● 酶标仪设置错误

在酶标仪上检查波长和滤光片设置

标曲OD偏低但样本OD值正常

可能原因

相应对策

● 标准品部分降解

按照说明书推荐方式保存标准品。开封后的标准品应以最高浓度用EP管分装冻存,保存于-20℃,半个月内使用有效

● 标准品复溶不当

打开前将标准品短暂离心,检查复溶后是否有未溶解的物质

● 标准品稀释不正确

按照说明书要求,保证按正确倍比梯度稀释

标曲线性佳但样本OD值偏低

可能原因

相应对策

● 基质效应

稀释样本可以降低基质效应

● 钩状效应

预估样本浓度选择合适的稀释倍数,并通过预实验选择最佳稀释倍数

● 靶蛋白丰度不足

重复实验,浓缩样本或选用灵敏度更高的试剂盒

● 样本处理或保存不当

确保正确采集与保存样本,避免反复冻融

● 样本类型不适用

检测的样本类型不分泌检测的因子、不是均质澄清溶液(高脂/粘稠溶剂)、重组蛋白不能匹配抗体。应选择与检测样本类型相匹配的ELISA试剂盒

以上,分享给大家的常见ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策,更多问题欢迎大家在评论区留言补充。

如何正确的进行elisa检测(ELISA实验常见问题二)(1)

Elabscience®ELISA试剂盒特点:

产品数量多:1300 ELISA试剂盒,涉及10多个研究领域。

种属范围广:包含人、小鼠、大鼠、兔、猴、猪等

规格种类多:48T/96T/96T*5

套装完整性:包含实验所需整套试剂,方便使用

高精密度:批内、批间CV<10%

良好回收率:80%~120%

高灵敏度:pg级

高特异性:交叉反应率<10%

文献支持:SCI文献引用约8000篇

货期短:大量现货,2-3个工作日内发货

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