pcr仪器的发展综述（第三代ARMSPCR技术问世）

近年来，我国分子诊断市场规模保持快速增长趋势，PCR技术是目前最为成熟且临床应用最广泛的分子诊断技术，占整体分子诊断市场的50%以上。随着第三代PCR技术（数字PCR技术）的迅速发展，PCR技术整体市场占有率有望进一步提高。

目前PCR试剂盒开发主要采用TaqMan探针法（突变位点位于TaqMan探针上）和ARMS法（突变位点位于引物3’端），二者瑜亮之争，各有长短。TaqMan探针法具有成熟度高、特异性高等优点，但探针设计难度较大、背景信号较高，而低背景/高特异性的MGB-TaqMan探针更加昂贵，在超多重PCR体系开发方面效率和难度都较高。ARMS方法具有检测灵敏度更高、可检测低至0.5%的突变，且体系设计与优化成本更低等特点。

尽管ARMS PCR技术具有显著的优点，但设计出稳定且特异性很高的ARMS检测体系仍然相当挑战。

第一代ARMS PCR技术为了提高突变检测的特异性，需要在引物3’端额外引入多个碱基错配（引物设计难度较大），从而保证检测的特异性。

第二代ARMS PCR技术为了提高突变检测的特异性，艾德生物采用独特的专利技术将引物设计为环化引物，并且在3’端引入错配碱基，即Super-ARMS，但Super-ARMS技术引物设计仍然相对复杂，不易大规模普及使用。

为了降低ARMS PCR技术引物设计的难度，并进一步提高ARMS PCR技术的特异性，上海小海龟科技有限公司近日推出第三代ARMS PCR技术，即Perfect-ARMS技术，该技术不需要设计环化引物、使用创新的超高特异性神甄™（Single Nucleotide Ultra Precision Polymerase, SNUPP ）DNA聚合酶，可以准确识别引物3’端单碱基错配，只需要在引物3’端设计一个识别碱基，即可以实现高度特异性的ARMS检测。Perfect-ARMS技术变革性地降低了ARMS试剂盒开发难度，让PCR试剂盒开发“简”到极致、高效到极致、成本降低到极致。同时，Perfect-ARMS技术既适用于荧光PCR平台，又适用于最新的数字PCR平台。

图1. ARMS PCR技术路线图

Perfect-ARMS PCR实验案例展示

图2. Perfect-ARMS在qPCR检测中的应用案例展示

图3. Perfect-ARMS在数字PCR检测中的应用案例展示

关于上海小海龟科技

上海小海龟科技有限公司是一家立足于基因检测上游仪器、芯片耗材开发的高新技术企业，2022年获得中国首张数字PCR计量评价证书，2016年获批国家发改委“基因检测技术应用示范中心”，先后承担多项上海市生物医药领域科技支撑专项和科技部“科技助力经济2020”专项，推出多款数字PCR系统并取得医疗器械注册证书，并基于此系统开发完成约40款检测试剂盒，包括肿瘤伴随诊断、肿瘤早筛、优生优育、病毒检测等。