胶原蛋白质检（胶原蛋白纯度检测服务）

一、简介

二、实验原理

利用1型胶原蛋白具有其他蛋白质所没有的三股螺旋结构，配合特异性的胶原酶作用，通过考马斯亮蓝对牛血清白蛋白(BSA)染色极限的确定，利用 SDS-PAGE 法测定1型胶原蛋白的成分。

三、实验步骤

3.1 考马斯亮蓝对 BSA 的染色极限分析

取各浓度 BSA 溶液 20 µL 上样。按照《中华人民共和国药典》(2015 年版）0541 电泳法第四法规定的方法进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后用凝胶成像系统对脱色后的胶片进行分析，确定考马斯亮蓝 对 BSA 的染色极限。3.2 样品中I型胶原蛋白成分测定 样品 a:用 3%的乙酸溶解样品，使样品质盐浓度为 1 mg/mL。样品 b:用胶原酶溶液溶解样品，配制成样品质量浓度和样品 a 相同，于 37℃水浴中加热 4 h。样品 C: 取超纯水加胶原酶溶液，使胶原酶的质晕浓度与样品b的质量浓度相同。上样分析：将上述样品与 2X的样品缓冲液等体积混合后，置于 100℃水浴中 1 min-2 min, 取出。

进行 SDS-PAGE 电泳。 待测样品、BSA (取染色极限量）和分子量标准品上样体积均为 20 ul电泳电压110 V。 电泳结束后用凝胶成像系统对脱色后的胶片进行分析，记录条带光密度。

四、实验结果计算计算公式：X =A- （B-C)x—待测样品中 I 型胶原蛋白成分含量，％；A—样品a中所有条带光密度之和，％；B一样品b中所有条带光密度之和，％；c—样品c中所有条带光密度之和，％。五、示例电泳图

P1、SDS-PAGE电泳图

P2、SDS-PAGE电泳图灰度计算