荧光抗体免疫标记实验步骤（免疫细胞化学染色实验操作流程）

1.固定：去除残留液体，用1X PBST清洗接种在干净玻片上的细胞3次，每次3min在室温下用新鲜配制的4%多聚甲醛固定15min，今天小编就来聊一聊关于荧光抗体免疫标记实验步骤?接下来我们就一起去研究一下吧!

荧光抗体免疫标记实验步骤

1.固定：去除残留液体，用1X PBST清洗接种在干净玻片上的细胞3次，每次3min。在室温下用新鲜配制的4%多聚甲醛固定15min。

2.1XPBST漂洗三次：去除固定液，1XPBST漂洗3次，每次5min。

3.透化：在1XPBST中加0.1% Triton X-100，孵育20分钟以提高通透性。

4.1XPBST漂洗三次：去除残留液体，1XPBST漂洗3次，每次5min。

5.封闭：去除残留液体，在切片上加5% BSA或血清。确保血清与二抗来源于相同物种。然后在室温下孵育20min。

6.孵育一抗：去除残留液体，用适当稀释比例的一抗覆盖组织部位，4oC过夜孵育。

7.复温：将切片从4oC移至室温静置约20min，不要立即冲洗切片。

8.1XPBST漂洗三次：去除残留并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM漂洗5 min，重复3次。

9.孵育荧光偶联的二抗：去除残留液体，用适当稀释比例的二抗覆盖组织部位，4℃避光孵育60 min。

10.1XPBST漂洗三次：去除残留并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM漂洗5 min，重复3次。

11.滴加50% PBS 50% 甘油于玻片上，立即置于显微镜下观察。