脱氢乙酸钠gb25547-2010检验结果（GBT19681-2005）

GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法

前言

本标准遵循GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》的编写规则。

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。

本标准由国家粮食质量监督检验中心归口。

本标准起草单位：国家粮食质量监督检验中心，大连市产品质量监督检验所。

本标准主要起草人：潘炜、王春燕、李鹏、董广彬、于利军。

1范围

本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。

本标准规定了食品中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的高效液相色谱测定方法。

方法最低检测限：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为10μg/kg。

2术语和定义

2.1 苏丹红

属偶氮系列化工合成染料。

3方法要点

样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱-紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

4试剂与标准品

4.1 乙腈色谱纯

4.2 丙酮色谱纯、分析纯

4.3 甲酸分析纯

4.4 乙醚分析纯

4.5正己烷分析纯

4.6无水硫酸钠分析纯

4.7层析柱管：1cm（内径）×5cm（高）的注射器管。

4.8 层析用氧化铝(中性100目~200目）：105℃于燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。

注：不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略作调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1μg/mL的苏丹红的混合标准溶液1mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL完全洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。

4.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用（苏丹红专用柱）。

4.10 5%丙酮的正己烷液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。

4.11 标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%

4.12 标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪(配有紫外可见光检测器）

5.2 分析天平：感量0.1mg

5.3 旋转蒸发仪

5.4 均质机

5.5 离心机

5.6 0.45μm有机滤膜

6样品制备

将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。

7操作方法

7.1 样品处理

7.1.1 红辣椒粉等粉状样品

称取1 g~5g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入10mL ~ 30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中(4.9），为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL~ 30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL（4.10） 洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45 μm有机滤膜过滤后待测。

7.1.2 红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品

称取0.5g~2g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入适量正己烷溶解(约1 mL~ 10mL）， 难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。按7.1.1中 “慢慢加入到氧化铝层析……过滤后待测”操作。

7.1.3 辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品

称取10g~20g（准确至0.01g）样品于离心管中，加10mL ~ 20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL正己烷：丙酮= 3：1， 匀浆5min， 3000rpm离心10min， 吸出正己烷层，于下层再加入20mL×2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱……过滤后待测” 操作。

7.1.4香肠等肉制品

称取粉碎样品10g~20g（准确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL 正己烷充分匀浆5min，滤出清液，再以20mL×2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱……过滤后待测”操作。

7.2 推荐色谱条件

7.2.1 仪器条件

■色谱柱： Zorbax SB-C18 3.5μm 4. 6mm×150mm（ 或相当型号色谱柱）

■流动相：

——溶剂A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈= 85：15

——溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20

■梯度洗脱：流速：1mL/min 柱温： 30℃ 检测波长： 苏丹红Ⅰ478nm ；苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ 520nm；于苏丹红Ⅰ出峰后切换。进样量10μL。梯度条件见表1。

7.2.2标准曲线

吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL ，用正己烷定容至25mL，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2. 56μg/mL，绘制标准曲线。

7.3计算

按公式(1）计算苏丹红含量

R=C×V /M ……（1）

R——样品中苏丹红含量，单位为亳克每千克(mg/kg）；

C——由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每亳升(μg/mL）；

V——样液定容体积，单位为毫升(mL）；

M——样品质量，单位为克(g）。

转载自：http://www.xpl-hplc.com/enstyle/articleinfo_11737654.html?_v=1672044700

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