酵母双杂交技术原理和步骤

酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid，Y2H）是一种常用的蛋白质相互作用研究技术，可用于鉴定蛋白质之间的相互作用和筛选相互作用的蛋白质其原理是利用酵母细胞的转录因子分裂成两个部分，其中一部分与目标蛋白质融合，另一部分与启动子融合只有当目标蛋白质与融合转录因子结合时，才能恢复转录因子的完整性，从而启动下游基因的表达，今天小编就来聊一聊关于酵母双杂交技术原理和步骤?接下来我们就一起去研究一下吧!

酵母双杂交技术原理和步骤

酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid，Y2H）是一种常用的蛋白质相互作用研究技术，可用于鉴定蛋白质之间的相互作用和筛选相互作用的蛋白质。其原理是利用酵母细胞的转录因子分裂成两个部分，其中一部分与目标蛋白质融合，另一部分与启动子融合。只有当目标蛋白质与融合转录因子结合时，才能恢复转录因子的完整性，从而启动下游基因的表达。

步骤如下：

1. 构建酵母表达载体：将目标蛋白质的编码序列与酵母表达载体的DNA序列重组，构建融合蛋白表达载体。

2. 酵母双杂交：将融合蛋白表达载体和另一个融合转录因子表达载体共同转化到酵母细胞中，并培养在含有选择剂和低营养物的培养基中，使只有融合蛋白相互结合时，酵母细胞才能生长。

3. 鉴定相互作用：通过对生长的酵母细胞进行筛选，识别出具有蛋白质相互作用的群体。

4. 验证相互作用：通过其他实验验证相互作用的真实性。例如，可以利用蛋白质共沉淀实验或荧光共振能量转移实验等方法，验证相互作用是否确实存在。