怎么区分蛋白和抗体（如何准确测定蛋白）

整体分子量测定和糖型鉴定是抗体药物研发及生产中不可或缺的表征内容，而在完整蛋白层面进行测定可获得最为直接的测定结果。实现此类测定有赖于可提供较高分辨能力及质量精度的仪器; 测定中涉及的相对复杂的参数设置可能受多种条件的干扰而产生误导性结果。生物制药行业已将 LC/MS 广泛应用于治疗性蛋白质的分子量确定。这种方法快速、准确，可实现相对定量。准确的质量测量有助于确定预期的翻译后修饰 (PTM) 是否表达为正确的蛋白质序列，其还提供了同一样品中不同蛋白质或 PTM 的相对丰度。高分离度和高灵敏度质谱仪有利于这一分析的进行。本文介绍了一种使用AB 5600 Q-TOF 质谱仪进行的完整蛋白质分析的检测方法。

一、实验方法

流动相条件：

1. 1. 柱温60℃，上样量10μl
2. 2. 正离子模式：A：0.1%甲酸水；

B：0.1%甲酸乙腈

流动相洗脱梯度表：

质谱条件：

AB 5600 Triple TOF质谱仪能够在控制软件（AnalystTF 1.7, AB Sciex）控制下进行一级质谱数据采集。一级采集范围900-4000。ESI离子源参数设置如下：雾化气压（GS1）：45Psi，辅助气压：45Psi，气帘气压：35Psi，温度：650℃，喷雾电压：5000V（正离子模式）。

二、质谱数据去卷积分析

通过BioPharmaView软件，对质谱数据进行去卷积分析

软件分析方法一般如下图，特殊蛋白样品要再调整

软件特点1：可以根据实际情况添加多种修饰，准确测定分子量，软件内包含200多种糖基化修饰糖型。

软件特点2：直观的检测报告展示形式

图1：质谱图标注

图2：去卷积后结果，展示分子量

三、服务简介

1、样品要求：浓度大于0.2ug/ul,体积大于50ul,含盐量不超过10mM

2、实验周期：7个工作日

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